一、实验器材及试剂
1、 实验器材
名称 | 厂家 | 型号 |
脱水机 | 上海徕卡仪器有限公司 | ASP300S |
包埋机 | 上海徕卡仪器有限公司 | HistoCore Arcadia H |
病理切片机 | 上海徕卡仪器有限公司 | RM2235 |
冻台 | 江丰生物科技有限公司 | KF-EMC-100 |
组织摊片机 | 江丰生物科技有限公司 | KF-WS-100 |
烤箱 | 山东博科科学仪器有限公司 | BJPX-HGZ75 |
载玻片 | CITOGLAS |
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2、 主要实验试剂
试剂名称 | 厂家 | 货号 |
二甲苯 | 国药集团化学试剂有限公司 | 10023418 |
革兰氏染液套装 | Servicebio | G1065 |
中性树胶 | 国药集团化学试剂有限公司 | 10004160 |
二、实验步骤
1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,自来水洗。
2、革兰氏染色:切片滴加革兰氏染液A滴染10s-30s,水洗,甩干;滴加革兰氏染液B1min,水洗,甩干;巴氏吸管吸取革兰氏染液C从载玻片磨砂面一端冲洗组织进行分化,至切片流下的革兰氏染液C呈无色即可,水洗,甩干;将切片浸革兰氏染液D溶液1s水洗,镜检,烤箱烤干。
3、脱水:将烤干的切片快速入三缸无水乙醇快速脱水,依次1s、3s、5s。
4、透明封片:切片放入干净的二甲苯5min透明,中性树胶封片。
5、显微镜镜检,图像采集分析。
三、结果判读:
革兰氏阳性菌呈紫色,革兰氏阴性菌呈红色。
四、注意事项:
1、染色过程中的革兰氏染液C分化是关键步骤,需注意分化程度。
2、尽量不要重复染色,分化液在脱去片子颜色的同时也改变了细胞壁的通透性,影响了最后结果的准确性。
3、冬季气温较低时,染色时间可适当延长。
仅供科研用途,不可用于临床诊断!