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改良天狼猩红染色实验报告

一、实验器材及试剂

1、 实验器材

名称

厂家

型号

脱水机

上海徕卡仪器有限公司

ASP300S

包埋机

上海徕卡仪器有限公司

HistoCore Arcadia H

病理切片机

上海徕卡仪器有限公司

RM2235

冻台

江丰生物科技有限公司

KF-EMC-100

组织摊片机

江丰生物科技有限公司

KF-WS-100

烤箱

山东博科科学仪器有限公司

BJPX-HGZ75

载玻片

CITOGLAS


2、 主要实验试剂

试剂名称

厂家

货号

无水乙醇

国药集团化学试剂有限公司

100092683

二甲苯

国药集团化学试剂有限公司

10023418

天狼猩红染液

索莱宝

G1472

中性树胶

国药集团化学试剂有限公司

10004160

二、实验步骤

1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入环保型脱蜡液Ⅰ 20min—环保型脱蜡液Ⅱ 20min—无水乙醇Ⅰ 5min—无水乙醇Ⅱ 5min—75%酒精5min,自来水洗。

冰冻切片复温固定:将冰冻切片从-20°冰箱取出恢复至室温,用组织固定液固定15min后流水冲洗。

2、天狼猩红染色:切片稍甩干水入改良天狼猩红A液浸染2 min;切片过两缸自来水冲洗,入改良天狼猩红B液浸染30 min。

3、脱水封片:切片依次入四缸无水乙醇各3-5s快速漂洗脱水,再放入干净的二甲苯透明1min,中性树胶封片。

4、显微镜镜检,图像采集分析。

四、结果判读:

光学显微镜下胶原纤维红色,背景黄色;偏振光下,Ⅰ型胶原呈橘黄色或亮红色的粗纤

维,Ⅲ型胶原呈绿色的细纤维。

五、注意事项:

1、天狼猩红B液染色过程中需要盖住湿盒,避免有效成分挥发,影响染色效果。

2、冰切由于切片厚度的影响,染色时间要缩短。