一、实验器材及试剂
1、 实验器材
名称 | 厂家 | 型号 |
脱水机 | 上海徕卡仪器有限公司 | ASP300S |
包埋机 | 上海徕卡仪器有限公司 | HistoCore Arcadia H |
病理切片机 | 上海徕卡仪器有限公司 | RM2235 |
冻台 | 江丰生物科技有限公司 | KF-EMC-100 |
组织摊片机 | 江丰生物科技有限公司 | KF-WS-100 |
烤箱 | 山东博科科学仪器有限公司 | BJPX-HGZ75 |
载玻片 | CITOGLAS |
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2、 主要实验试剂
试剂名称 | 厂家 | 货号 |
无水乙醇 | 国药集团化学试剂有限公司 | 100092683 |
二甲苯 | 国药集团化学试剂有限公司 | 10023418 |
天狼猩红染液 | 索莱宝 | G1472 |
中性树胶 | 国药集团化学试剂有限公司 | 10004160 |
二、实验步骤
1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入环保型脱蜡液Ⅰ 20min—环保型脱蜡液Ⅱ 20min—无水乙醇Ⅰ 5min—无水乙醇Ⅱ 5min—75%酒精5min,自来水洗。
冰冻切片复温固定:将冰冻切片从-20°冰箱取出恢复至室温,用组织固定液固定15min后流水冲洗。
2、天狼猩红染色:切片稍甩干水入改良天狼猩红A液浸染2 min;切片过两缸自来水冲洗,入改良天狼猩红B液浸染30 min。
3、脱水封片:切片依次入四缸无水乙醇各3-5s快速漂洗脱水,再放入干净的二甲苯透明1min,中性树胶封片。
4、显微镜镜检,图像采集分析。
四、结果判读:
光学显微镜下胶原纤维红色,背景黄色;偏振光下,Ⅰ型胶原呈橘黄色或亮红色的粗纤
维,Ⅲ型胶原呈绿色的细纤维。
五、注意事项:
1、天狼猩红B液染色过程中需要盖住湿盒,避免有效成分挥发,影响染色效果。
2、冰切由于切片厚度的影响,染色时间要缩短。