冰冻切片ROS实验报告

冰冻切片 ROS 染色实验报告

1.  实验器材及试剂

1.1 实验器材

2.  实验步骤

2.1 画圈，淬灭组织自发荧光：冰冻切片在室温下复温，控干水分。用组化笔在组织周

围画圈，加自发荧光淬灭剂 5min，流水冲洗 10min。

2.2 染色：在圈内滴加 ROS 染液(5ug/L）， 避光恒温箱 37 °孵育 30min。

2.3DAPI 复染细胞核：玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 5min。

加 DAPI 染液，避光室温孵育 10min。

2.4 封片：玻片置于 PBS（PH7.4） 中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 5min。抗荧光

淬灭封片剂封片。

2.5 采集图像:DAPI 激发波长 330-380nm，发射波长 420nm；488 激发波长 465-495nm， 发射波长 515-555 nm；CY3 激发波长 510-560 nm，发射波长 590nm；CY5 激发波长 608-648nm,

发射波长 672-712 nm。

3.  结果判读

DAPI 通道细胞核为蓝色，CY3 通道阳性为红色。